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色譜柱老化的時(shí)間一般是多久

更新時(shí)間:2025-09-04 瀏覽次數(shù):827

色譜柱老化時(shí)間沒(méi)有固定標(biāo)準(zhǔn),需根據(jù)色譜柱類型、新柱 / 舊柱狀態(tài)、固定相特性目標(biāo)分析需求綜合判斷,核心原則是 “充分去除雜質(zhì)且不損傷固定相",常見(jiàn)場(chǎng)景的時(shí)間范圍及影響因素如下:

一、不同類型色譜柱的常規(guī)老化時(shí)間(參考)

不同色譜柱的固定相穩(wěn)定性、出廠殘留(如溶劑、低分子聚合物)差異較大,老化時(shí)間差異顯著,以下為最常見(jiàn)的兩類色譜柱參考:


色譜柱類型常見(jiàn)場(chǎng)景老化時(shí)間范圍核心目的
氣相色譜(GC)柱新柱(未使用過(guò))1~4 小時(shí)(程序升溫)去除固定相合成殘留、溶劑,激活固定相

舊柱(長(zhǎng)期閑置 / 污染)0.5~2 小時(shí)(恒溫 / 程序升溫)去除柱內(nèi)殘留樣品、水分或低沸點(diǎn)雜質(zhì)
高效液相(HPLC)柱新柱(未使用過(guò))0.5~1.5 小時(shí)(等度沖洗)平衡固定相,去除柱內(nèi)保存溶劑(如甲醇 / 乙腈)

舊柱(污染 / 柱效下降)1~3 小時(shí)(梯度 / 強(qiáng)溶劑沖洗)洗脫殘留污染物(如蛋白、強(qiáng)保留組分)

二、影響老化時(shí)間的關(guān)鍵因素

老化時(shí)間并非越長(zhǎng)越好(過(guò)度老化可能導(dǎo)致固定相流失、柱效下降),需結(jié)合以下因素調(diào)整:

1. 固定相穩(wěn)定性(核心限制)

  • GC 柱:固定相的最高使用溫度決定老化溫度上限,進(jìn)而影響時(shí)間。例如:

    • 弱極性固定相(如 SE-30,最高溫 320℃):可在接近最高溫(如 300℃)下老化 1~2 小時(shí),效率高;

    • 強(qiáng)極性固定相(如 PEG-20M,最高溫 250℃):需在較低溫度(如 220℃)下延長(zhǎng)老化至 2~4 小時(shí),避免固定相分解流失。

  • HPLC 柱:反相柱(C18、C8)耐有機(jī)溶劑,可用甲醇 - 水或乙腈 - 水沖洗 0.5~1 小時(shí);正相柱(硅膠柱)易水解,需用正己烷 - 異丙醇緩慢平衡,時(shí)間可延長(zhǎng)至 1~1.5 小時(shí)。

2. 色譜柱狀態(tài)(新柱 vs 舊柱)

  • 新柱:出廠時(shí)可能殘留合成溶劑(如二氯甲烷、甲苯)或保護(hù)劑,需充分老化(尤其是 GC 柱),避免殘留雜質(zhì)干擾后續(xù)分析;若新柱直接用于高靈敏度檢測(cè)(如痕量分析),需額外延長(zhǎng) 0.5~1 小時(shí)。

  • 舊柱:若僅短期閑置(1~2 周),老化 0.5 小時(shí)即可;若因樣品殘留導(dǎo)致柱效下降(如峰展寬、拖尾),需用強(qiáng)溶劑(如 GC 用高沸點(diǎn)溶劑、HPLC 用純乙腈)沖洗 1~2 小時(shí),再恢復(fù)至分析條件平衡。

3. 載氣 / 流動(dòng)相純度

  • GC 柱:若載氣(氮?dú)狻⒑猓┘兌鹊停ㄈ绾鯕?、水分),?huì)加速固定相氧化,需降低老化溫度、延長(zhǎng)時(shí)間(如從 2 小時(shí)增至 3 小時(shí)),同時(shí)確保載氣經(jīng)過(guò)脫水、脫氧凈化;

  • HPLC 柱:流動(dòng)相若含緩沖鹽(如磷酸鹽),需先用水相沖洗(去除鹽殘留),再用有機(jī)相平衡,避免鹽結(jié)晶堵塞柱床,此時(shí)老化時(shí)間需增加 0.5 小時(shí)。

三、判斷老化是否完成的關(guān)鍵指標(biāo)

無(wú)需嚴(yán)格卡時(shí)間,可通過(guò)以下指標(biāo)確認(rèn)老化充分,避免過(guò)度老化:


  1. GC 柱

    • 基線平穩(wěn):在老化溫度下,檢測(cè)器(如 FID)基線漂移≤0.1mV/h,噪聲≤0.05mV,無(wú)雜峰出現(xiàn);

    • 固定相流失低:若用 MS 檢測(cè)器,總離子流(TIC)基線無(wú)持續(xù)上升(避免固定相碎片干擾)。

  2. HPLC 柱

    • 壓力穩(wěn)定:系統(tǒng)壓力波動(dòng)≤0.5MPa(1 小時(shí)內(nèi)),無(wú)突然升高 / 降低;

    • 基線平直:紫外檢測(cè)器(如 254nm)基線漂移≤0.005AU/h,無(wú)殘留峰洗脫。

總結(jié)

  • 優(yōu)先參考說(shuō)明書(shū):不同廠商(如默克)的色譜柱會(huì)標(biāo)注推薦老化條件(溫度、時(shí)間),需以說(shuō)明書(shū)為首要依據(jù);

  • 靈活調(diào)整:新柱、強(qiáng)極性柱、痕量分析需延長(zhǎng)時(shí)間(1~4 小時(shí));舊柱、弱極性柱、常規(guī)分析可縮短(0.5~2 小時(shí));

  • 避免過(guò)度:GC 柱老化溫度不超過(guò)固定相最高使用溫度的 90%,HPLC 柱避免長(zhǎng)時(shí)間用純有機(jī)相沖洗(可能導(dǎo)致固定相塌陷)。



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